动物组织内细胞依靠细胞外基质（胶原蛋白、纤连蛋白、层粘连蛋白）、桥粒、紧密连接粘连在一起。常规机械剪碎只能剥离表层细胞，深层细胞被基质包裹；酶解可渗透组织内部，相比剧烈机械研磨，酶解依靠生化反应分解蛋白，对细胞膜损伤更小，细胞存活率更高，适合活细胞后续功能实验。胶原酶、胰蛋白酶等酶既可降解胞外基质蛋白，拆散细胞团块，温和保护细胞活性，获得完整单细胞悬液，用于单细胞测序，流式分析分选、原代细胞培养、免疫荧光等实验（比如原代巨噬细胞、肿瘤细胞分离）。适当机械剪碎＋合适酶组合，打破细胞间连接，充分释放目标细胞，提升细胞得率，以得到完整单细胞。

免疫细胞本身对消化酶耐受度高于上皮细胞，核心目标：降解胶原、纤维连接蛋白，打散组织团块，尽量不破坏免疫细胞膜表面抗原；常用酶：胶原酶 Ⅰ/Ⅳ、分散酶 Dispase、DNase I（去除细胞成团 DNA，提升活率），极少单用胰蛋白酶（主要是贴壁细胞的消化）。

一、各种组织常规酶配方

1. 脾脏、淋巴结（免疫器官，结缔组织少，温和消化）

适用：T/B 细胞、树突状细胞、巨噬细胞

方案 1（简易）：胶原酶 Ⅳ + DNase I

方案 2（更高细胞产量）：胶原酶 Ⅳ + Dispase II + DNase I

消化条件：37 ℃ 15–25 min，间断吹打，无需长时间孵育

2. 肺组织（致密、大量胶原，肺间质巨噬细胞、DC）

经典组合：胶原酶 Ⅰ + 胶原酶 Ⅳ + DNase I

进阶强效版：胶原酶 Ⅳ + Dispase + DNase I

消化时长：30–45 min，中途吹打 2 次

3. 肝脏（肝巨噬细胞 Kupffer 细胞，胶原丰富）

原位灌流：胶原酶 Ⅳ（肝脏灌流主流酶）

体外消化：胶原酶 Ⅳ + DNase I

注：肝脏细胞脆弱，消化不可超过 40 min

4. 脑组织（小胶质细胞，神经组织致密）

标准组合：胶原酶 Ⅳ + Dispase II + DNase I

温和方案（减少细胞凋亡）：低浓度胶原酶 Ⅳ+DNase I

消化：37 ℃ 40–60 min

5. 骨髓（几乎不用复合酶）

骨髓细胞松散，仅需研磨过滤；仅骨髓基质免疫细胞提取时少量胶原酶 Ⅳ+DNase。

6.特殊组织

骨组织，血管组织，胰腺组织（难解离），耳蜗组织，心脏组织，胃肠道组织，输卵管组织，眼球组织，眼角膜组织和卵巢组织为非常难彻底酶解的组织，建议订购Biotarget品牌各种针对特殊组织经方法充分测试，酶组分组合优化的Cell-Out®组织酶解解离液试剂盒。

二、常见三种核心酶的功能

• 胶原酶 Ⅳ（免疫分离首选）：温和降解 Ⅰ、Ⅳ 型胶原，对免疫细胞膜蛋白损伤小，适合各类免疫器官

• Dispase II（分散酶）：分解纤维粘连蛋白、上皮连接蛋白，适合致密组织（肺、脑、肿瘤），降低细胞团块

• DNase I：细胞破裂释放 DNA 会使细胞粘连成团，加入 DNase 降解游离 DNA，大幅提升活细胞得率、减少细胞聚集

三、避坑要点

• 尽量不用胰蛋白酶：胰酶会切割 CD 分子，后续流式染色信号大幅下降

• 适时终止消化：含血清完全培养基等中和酶活性

四、极简通用万能配方（绝大多数免疫组织适用）

RPMI 1640 基础液 + 1 mg/mL 胶原酶 Ⅳ + 50 U/mL DNase I

致密组织额外添加 0.5 mg/mL Dispase II。